采用摇瓶培养液体菌种时，可以采用往复式摇床或者旋转式摇床。往复式摇床的往复频率一般在80～140r/min，冲程一般为5～14cm，在频率过快、冲程过大或瓶内液体过多时，振荡使液体容易溅到瓶口纱布上而造成污染。旋转式摇床的偏心距一般为3～6cm，旋转次数为60～300r/min，它的结构比较复杂，加工安装要求比往复式摇床高，造价也较贵，但是氧的传递好、功率消耗低，培养基一般不会溅到棉塞上。因此，要根据实际需要选择合适的摇床及振荡速度。

    1．摇瓶培养的工艺流程 制备培养基一分装一灭菌一冷却一接种一摇床培养一一级液体菌种一二级液体菌种。

    2．摇瓶培养要点

    (1)培养基的配制 按配方称好各种成分，装入容器中，加水溶解后，分装入三角瓶中，一般250～300mL三角瓶装50mL培养液，500mL三角瓶装100mL培养液，塞上棉塞，用报纸包扎；也可用8层纱布做成8cm×8cm的瓶塞封口，外面用牛皮纸封口。

    (2)灭菌一般采用高压灭菌方法，灭菌要求121℃、30min。取出冷却到30℃左右，放人无菌室或接种箱内备用。

    (3)接种 按无菌操作要求每瓶接入2～3cm2的斜面菌种一块，每支斜面菌种可接4～5瓶。接入的菌种稍带点培养基为好，能使其浮在培养基的表面，接种后用原塞瓶口的纱布展开后盖在瓶口，并用线绳扎牢。

    (4)培养接种好的菌种瓶可置于摇床上培养，也可置于24～26℃恒温下静置培养48h后，待气生菌丝延伸到培养液中后再进行振荡培养。往复式摇床的振荡频率为80～120r/min，旋转式摇床的频率为150～220r/min，摇床培养3～4d即可。培养结束时，因菌种不同，培养液出现不同色泽，如平菇、金针菇的培养液呈浅黄色；香菇、猴头菇的培养液呈红棕色，并有菇香味；木耳的培养液呈褐色，黏稠有香甜味。培养液经检测，无杂菌污染，菌丝干重达10g/L，菌丝球直径在1～2mm时，方可用于生产或进一步扩大培养。

    (5)二级液体菌种制作 二级液体菌种培养基的制作同一级液体菌种，培养容器要大些，可采用5000mL三角瓶，装量不超过3500mL。灭菌冷却后，将已经发酵好的一级液体菌种按5%～10%的比例接入5000mL三角瓶中，置摇床上培养，转速要适当慢些。经过一定时间的振荡培养，就可得到菌球均匀分布、发酵液清澈透明的液体菌种。